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糖蛋白染色試劑盒
 產品貨號: RTD6501
 產品名稱: 糖蛋白染色試劑盒
 產品價格/規格: 10次 1000元
 產品說明書: 點擊查看
 更新時間: 2019-10-18
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    產品編號

    規格

    運輸

    RTD6501

    10

    RT

    產品簡介:                                                

    本產品用于PAGE 凝膠或蛋白免疫印記硝酸纖維素膜上糖蛋白的檢測。整個染色2.5小時完成。染色后的糖蛋白為品紅色條帶,背景為淺粉色或者無色。該試劑盒檢測的靈敏度一般可以達到微克級別,但實際靈敏度跟靶蛋白糖基化程度相關,可以用于 SDS-PAGE 和2D電泳的凝膠檢測,也可以用于瓊脂糖凝膠電泳的檢測(但背景較高),還可以用于硝酸纖維素印跡膜的檢測。

    按照每次使用25 ml糖蛋白染色試劑計算,本產品可以染色 8-10塊mini-PAGE(8×10cm)膠或印跡膜。

    產品組成:

    產品編號

    產品名稱

    規格

    貯存

    運輸

    RTD6501-1

    氧化試劑

    2.5 g

    常溫避光

    RT

    RTD6501-2

    糖蛋白染色試劑

    250 ml

    常溫避光

    RT

    RTD6501-3

    還原試劑

    1.25 g

    常溫避光

    RT

    RTD6501-4

    陽性對照(辣根過氧化物酶)

    1 mg

    -20

    RT

    RTD6501-5

    陰性對照(大豆胰蛋白酶抑制劑)

    1 mg

    -20

    RT

    PL080

    5×MonoClolor 蛋白上樣緩沖液

    1 ml

    -20

    RT

    -

    250ml棕色塑料瓶

    2

    -

    -

    -

    說明書

    1

    -

    -

    儲存條件

    按照標簽溫度貯存,常溫運輸。開封后一年有效。

    ●實驗前準備:

    1. 配制 3%醋酸溶液:將 15 ml 自備的冰醋酸與 485 ml 超純水混勻,常溫保存備用。

    2. 配制 50%甲醇溶液:將 250 ml 甲醇與 250 ml 超純水混勻,常溫保存備用。

    3. 配制氧化試劑溶液: 將本試劑盒提供的氧化試劑干粉轉移到本試劑盒提供的250ml空塑料瓶中, 然后加入250 ml的超純水,充分混勻溶解后得到氧化試劑溶液,常溫保存備用。

    4. 配制還原試劑溶液: 將本試劑盒提供的還原試劑干粉轉移到本試劑盒提供的 250ml 空塑料瓶中,然后加入 250 ml的超純水,充分混勻溶解后得到還原試劑溶液,常溫保存備用。

    5. 配制1×SDS-PAGE上樣緩沖液:取0.4 ml 5×MonoClolor 蛋白上樣緩沖液,加入1.6 ml超純水,-20℃貯存備用。

    6. 配制陽性對照(辣根過氧化物酶)溶液:向裝有 1 mg 辣根過氧化物酶固體的棕色管中加入 1 ml 1×SDS-PAGE 上樣緩沖液,所得辣根過氧化物酶溶液的濃度即為 1mg/ml,然后適量分裝成8-10管, 留下一管當天使用, 其余的放-20℃長期保存。 對于 8×10 cm的凝膠來說,每條泳道加 10 μl 的陽性對照溶液即可,上樣前95℃處理5分鐘。

    7. 配制陰性對照(大豆胰蛋白酶抑制劑)溶液:向裝有 1 mg 大豆胰蛋白酶抑制劑干粉的管中加入 1×SDS-PAGE 上樣緩沖液(自備),所得大豆胰蛋白酶抑制劑溶液的濃度即為 1 mg/ml,然后適量分裝成8-10管, 留下一管當天使用,其余的放-20℃長期保存。對于 8×10 cm的凝膠來說,每條泳道加 10 μl 的陽性對照溶液即可,上樣前95℃處理5分鐘。

    8. 樣品稀釋:用 5×MonoClolor 蛋白上樣緩沖液將樣品濃度稀釋為 1 mg/ml,SDS-PAGE 上樣緩沖液終濃度為 1×。對于 8×10 cm的凝膠來說,每條泳道加 5-10 μl 的樣品即可,上樣前95℃處理5分鐘。。

    凝膠染色的操作步驟(膜染色從步驟3開始):

    注意事項:

    1.以下步驟僅針對0.75mm厚度大小8×10cm的凝膠,1-1.5mm厚度凝膠或更大體積凝膠適當增加液體體積并延長操作時間。

    2. 請在通風櫥中進行以下操作。

    . 固定:

    取出電泳后的 SDS-PAGE 凝膠,在50 ml 50%甲醇溶液中,搖床慢搖30分鐘,棄甲醇溶液。

    . 漂洗:

    50 ml超純水洗滌凝膠兩次,每次搖床慢搖10分鐘,棄超純水。

    . 氧化:

    凝膠中加入 25 ml 氧化試劑,搖床慢搖15分鐘,棄溶液。

    . 漂洗:

    50 ml超純水洗滌凝膠3次,每次搖床慢搖5分鐘,棄溶液。

    . 染色:

    凝膠中加入25 ml糖蛋白染色試劑,搖床慢搖15 分鐘,糖蛋白會在5-10分鐘內顯現品紅色。若檢測的糖蛋白含量較低,適當延長顯色時間。棄染色溶液。

    注:若糖蛋白染色試劑中有晶體析出,只需取上清液即可,不要加熱溶解晶體。

    染色步驟會產生有刺激性氣味氣體,請在通風櫥中操作。

    . 還原:

    凝膠中加入 25 ml 還原試劑,搖床慢搖15分鐘,棄溶液。此時凝膠背景略帶紅色。

    . 漂洗:

    加入50 ml 3%醋酸溶液搖床慢搖洗滌膠塊3次,每次10分鐘,直至膠背景紅色變淺,接近淡紅色或無色,此時紅色糖蛋白主帶清晰可見。

    . 保存:

    膠塊保存在50 ml 3%醋酸溶液中。

    實驗記錄表格

    實驗日期:

    編號

    步驟

    體積

    時間

     

     

    凝膠尺寸 8×10 cm

    0.75mm膠或膜

    1

    固定

    50 ml

    30 min

    膜從步驟3開始

    2

    漂洗

    2×50 ml

    2×10 min

    3

    氧化

    25 ml

    15 min

    4

    漂洗

    3×50 ml

    3×5 min

    5

    染色

    25 ml

    15 min或更長

    條帶變為品紅色

    6

    還原

    25 ml

    5 min

    7

    漂洗

    3×50 ml

    3×10 min

    漂洗后凝膠背景變淺

    8

    保存

    50 ml

    -

    實驗示例:




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